Hoe word DNA-konsentrasie met behulp van spektrofotometer bereken?
Hoe word DNA-konsentrasie met behulp van spektrofotometer bereken?

Video: Hoe word DNA-konsentrasie met behulp van spektrofotometer bereken?

Video: Hoe word DNA-konsentrasie met behulp van spektrofotometer bereken?
Video: DNA concentration 2024, November
Anonim

DNA konsentrasie is geskat deur meet die absorpsie by 260nm, verstel die A260 meting vir troebelheid ( gemeet aan absorpsie by 320nm), vermenigvuldig deur die verdunningsfaktor, en gebruik die verhouding wat 'n A260 van 1.0 = 50 µg/ml suiwer dsDNA.

Mense vra ook, hoe vind jy die konsentrasie en suiwerheid van DNA?

Om te evalueer DNA suiwerheid , meet absorpsie van 230nm tot 320nm om ander moontlike kontaminante op te spoor. Die mees algemene reinheid berekening is die verhouding van die absorpsie by 260nm gedeel deur die lesing by 280nm. Goeie gehalte DNA sal 'n A hê260/A280 verhouding van 1,7–2,0.

Net so, wat is 'n goeie DNA-konsentrasie? A goed kwaliteit DNA monster moet 'n A hê260/A280 verhouding van 1,7-2,0 en 'n A260/A230 verhouding van groter as 1,5, maar aangesien die sensitiwiteit van verskillende tegnieke vir hierdie kontaminante verskil, moet hierdie waardes slegs geneem word as 'n riglyn vir die suiwerheid van jou monster.

Met betrekking tot hierdie, hoe bereken NanoDrop DNA-konsentrasie?

Jy vermenigvuldig die waarde van absorpsie by 260 nm met 'n vaste faktor (dit is 50 vir DNA ) en jy kry die DNA konsentrasie . Voilá. (Ok dis tegnies die A260 van 'n 10 mm dik monster wat met 50 vermenigvuldig word; die NanoDrop druk A260 uit asof die monster 10 mm dik was, soos in 'n standaard kuvet).

Hoekom moes ons 'n spektrofotometer gebruik om ons DNA te kwantifiseer?

A spektrofotometer is die gemiddelde konsentrasies van die nukleïensure kan bepaal DNA of RNA teenwoordig in 'n mengsel, sowel as hul suiwerheid. Met behulp van die Beer–Lambert-wet dit is moontlik om die hoeveelheid lig wat geabsorbeer word in verband te bring met die konsentrasie van die absorberende molekule.

Aanbeveel: