Hoeveel kos dit om 'n afbinding te transformeer?
Hoeveel kos dit om 'n afbinding te transformeer?

Video: Hoeveel kos dit om 'n afbinding te transformeer?

Video: Hoeveel kos dit om 'n afbinding te transformeer?
Video: Быстрая укладка плитки на стены в санузле. ПЕРЕДЕЛКА ХРУЩЕВКИ от А до Я #27 2024, November
Anonim

Transformasie . Voeg tussen 1-5 µl van afbinding mengsel te bekwame selle vir transformasie . Uitgebreid afbinding met PEG veroorsaak 'n drop-off in transformasie doeltreffendheid (vinnig Ligasie Kit). Elektroporasie word aanbeveel vir groot konstrukte (>10 000 bp).

Hiervan, hoeveel ligasieproduk benodig ek vir transformasie?

Transformasie . Voeg tussen 1-5 µl van afbinding mengsel te bekwame selle vir transformasie . Uitgebreid afbinding met PEG veroorsaak 'n inval transformasie doeltreffendheid (vinnig Ligasie Kit). Elektroporasie word aanbeveel vir groot konstrukte (>10 000 bp).

Die vraag is dan, wat is Ligasie en transformasie? In 'n tipiese kloningseksperiment plaas navorsers eers 'n stuk DNS, soos 'n geen, in 'n sirkelvormige stuk DNS wat 'n plasmied genoem word. Hierdie stap gebruik beperkingsensieme en DNA-ligase en word a genoem afbinding . Na a afbinding , is die volgende stap om die DNA in bakterieë oor te dra in 'n proses genaamd transformasie.

Vervolgens kan 'n mens ook vra, hoeveel DNA is nodig vir 'n afbinding?

Die algehele konsentrasie van vektor + insetsel moet tussen 1-10 Μg/ml wees vir doeltreffend afbinding . Vektor: Voeg molverhoudings tussen 1:1 en 1:10 aan (1:3 is tipies). As jy onseker is van jou DNA konsentrasies, voer veelvuldige afbindings met verskillende verhoudings uit.

Hoe lank kan jy 'n ligasiereaksie stoor?

Ligasies kan gedoen word by kamertemperatuur of koeler (dink 12-16°C) oornag of selfs vir 'n paar dae, as jy is regtig besig. Jy kan ook stoor 'n afbinding in die yskas en haal dit later uit om voort te gaan om by kamertemperatuur te lig vir so lank soos nodig.

Aanbeveel: