Wat is die doel van die PCR produk suiwering?
Wat is die doel van die PCR produk suiwering?

Video: Wat is die doel van die PCR produk suiwering?

Video: Wat is die doel van die PCR produk suiwering?
Video: WHEN YOU FEEL STUCK IN LIFE - How To Get Unstuck | Cheryl Richardson 2024, November
Anonim

Suiwering van DNA van a PCR reaksie is tipies nodig vir stroomaf gebruik, en fasiliteer die verwydering van ensieme, nukleotiede, primers en bufferkomponente. Tradisioneel is dit bewerkstellig met behulp van organiese ekstraksiemetodes, soos fenolchloroform-ekstraksie, gevolg deur etanolpresipitasie.

Die vraag is ook, hoekom is dit nodig om PCR-produkte te suiwer?

Jy moet PCR-produkte te suiwer om ontslae te raak van ongebruikte primers, nukleotiede en ensieme om die sukses van ligasie te optimaliseer, wat die instandhouding en volgorde van die produk van PCR . Om suiwer die PCR produkte , word grootte-uitsluitingschromatografie gebruik.

Wat moet ek ook doen na PCR? Om herstel te maksimeer, spoel die retentaatbeker twee keer uit met 10 tot 20 µL TE of water. Die finaal PCR reaksie kan tot 'n mikrogram geamplifiseerde DNA bevat wat vir 'n verskeidenheid molekulêre biologie toepassings gebruik kan word. Hierdie toepassings kan min of meer sensitief wees vir die oorblywende komponente van die PCR reaksiemengsel.

Mens kan ook vra, hoe maak jy PCR-produkte skoon?

Klassieke metodes wat gebruik word om skoon op PCR produkte voor volgordebepaling sluit in gelelektroforese, etanolpresipitasie en kolomchromatografie. Alhoewel dit redelik effektief is, kan hierdie metodes vinnig omslagtig word wanneer verskeie monsters in parallel verwerk word en wisselende grade van monsterverlies toon.

Hoekom moet die DNA skoongemaak word?

Ons skoon op DNA uit waterige oplossings om buffersoute, ensieme of ander stowwe wat stroomaftoediening kan beïnvloed, te verwyder. Voorbeelde sluit in PCR-reaksie skoon op, skoon op na beperking verteer en skoon op van genomiese of plasmied DNA besmet is met sellulêre proteïene/rommel.

Aanbeveel: